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武漢貝科新肽科技有限公司
主營：原位雜交,亞細胞定位,蛋白互作,啟動子篩選
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原位雜交技術(shù)的原理是什么？有何用途
原位雜交技術(shù)的原理是利用核酸分子單鏈之間有互補的堿基序列，將有性或非性的外源核酸(即探針)與組織、細胞或染色體上待測DNA或RNA互補配對，結(jié)合成專一的核酸雜交分子，經(jīng)一定的檢測手段將待測核酸在組織、細胞或染色體上的位置顯示出來。為顯示特定的核酸序列要具備3個重要條件：組織、細胞或染色體的固定、具有能與特定片段互補的核苷酸序列(即探針)、有與探針結(jié)合的標(biāo)記物(曾呈奎等2000)。
植物染色體原位雜交是一種重要的分子生物學(xué)技術(shù)，它可以用來研究植物基因組的結(jié)構(gòu)和功能。該技術(shù)利用DNA探針與目標(biāo)DNA序列的互補性結(jié)合，通過熒光或性標(biāo)記來檢測目標(biāo)DNA序列在染色體上的位置和數(shù)量。
植物染色體原位雜交技術(shù)的基本原理是將DNA探針標(biāo)記上熒光或性同位素，然后將其與目標(biāo)DNA序列進行雜交。在雜交過程中，探針與目標(biāo)DNA序列互補結(jié)合，形成穩(wěn)定的雙鏈DNA分子。隨后，通過熒光或性同位素探測技術(shù)，可以檢測到目標(biāo)DNA序列在染色體上的位置和數(shù)量。
原位雜交第三天
1） ? ? ? ?用1ml含10％熱滅清的MABT溶液置換溶液，放置搖床上25分鐘，然后用1mlMABT置換，25分鐘，再用1mlMABT溶液置換，一小時以上，后用1mlMABT溶液置換，熒光原位雜交技術(shù)，25分鐘。
2） ? ? ? ?用1ml 1mM左旋米睉的Staining buffer洗三次，每次放置五分鐘。
3）將胚胎轉(zhuǎn)入十六孔板中，吸去staining buffer，加上300ul BM Purple AP Substrate(底物，用之前加5mM左旋米唑)，十六孔板外面包上錫箔紙以避光，避免搖動，室溫下顯色。
4）每隔一小時觀察胚胎是否開始顯色
5）將顯色完全的胚胎中的底物吸出，用PBST洗兩三次后加上4％多聚甲醛固定，拍照。
6）4C冰箱保存。
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第3年
